1.1研发检测平台

a 科学团队与学术思想

宁云生团队由高校教授、博士、企业管理人共同成立，团队从事胃肠道、呼吸道疾病的基础研究近20年，部分研究成果已成功转化。团队建立的研究平台由大学和医院协同成立并发展，结合了高水平的基础研究、原创性筛选模型，以及丰富临床资源，主要针对病因不清、无体外诊断方法、缺乏有效的治疗药物的胃肠道几大顽疾-顽固性便秘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病等开展深入研究。项目成员发现的顽固性便秘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病的致病菌在国际上属于首创，并建立了体外诊断方法和临床干预指导方法。团队的主要目标是研制原创的、国际领先的慢性胃肠病诊断试剂和治疗药物。

b 重大科学发现

我国肠胃疾病发病率约占人口的10-12%，仅次于高血压，其中约有40%患者长期受到肠胃病的困扰。最严重或最广泛的慢性肠胃病有：慢性便秘、溃疡性结肠炎、科罗恩氏病、肠息肉、肠癌等。最大的医学困惑是发病原因不清楚，无法提出诊断、预警和治疗，只能是对症治疗。本研发团队经过20年的潜心研究，以逆向翻译（reverse translation）的方法，分别发现了顽固性便秘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病的致病菌，并成功研制出特异性检测顽固性便秘和炎症性肠病的方法：针对致病菌研发的探针法荧光定量PCR检测方法。

c检测仪器和检测方法（工作原理）

采用探针法荧光定量PCR特异性检测致病菌。

检测仪器为ABI QS5、ABI 7500、ABI Viia 7、Roche 480等

检测原理：以致病菌特异性ORFs为靶区域，设计双靶标基因检测引物探针，并根据16S保守靶区域设计内参引物和探针，反应结束后分析各通道的阈值循环数(Ct值)进行结果判断。同时，设计了监控PCR扩增效率的阳性质控品和阴性质控品，以保证检测结果的特异性和准确性。

d 图（照片）（仪器）

  ABI-Q5                                      ABI-7300                                         ABI Viia 7

1.2顽固性便秘菌PIB检测

a背景介绍

医学上认为便秘是一种肠道功能紊乱性疾病，主要表现为排便次数较少，粪便干硬，排便困难，肛门直肠有阻塞感，排便不尽感等。依据病程持续时间，可分为急性便秘（病程少于一周）和慢性便秘（持续大于3个月），慢性便秘又可根据发病原因分为原发性和继发性两类，继发性慢性便秘主要由某些药物或疾病引起（如帕金森综合征等），而原发性慢性便秘可分为三类：功能性便秘、肠易激综合征-便秘亚型和出口梗阻型便秘。

顽固性便秘是慢性便秘的一种严重情况，常规治疗对该类患者无效或疗效不佳，症状反复发作经久不愈，最终只能通过切除部分结肠的方式缓解痛苦。一般顽固性便秘需符合或部分符合以下症状：⑴症状出现六个月以上；⑵不用泻药很少出现稀粪；⑶包括下列两项以上情况：①超过25%以上排便有不尽感；②超过25%以上排便费力；③超过25%以上粪便为干球粪或硬粪；④超过25%以上排便有阻塞感；⑤超过25%以上排便需要其它辅助（如手指协助等）；⑥每周排便少于3次。

全球平均约10%的人群患有慢性便秘，部分是顽固性功能性便秘（IFC），无法治愈。顽固性便秘虽然不像恶性肿瘤等疾病一样立即危害人类生命，但其对健康的影响极为巨大，如与抑郁、心脑血管并发症、肛裂痔疮、肠癌等疾病密切相关。必需从人群中将IFC甄别出来，及早进行医学干预，避免不可逆病变发生。中国被检人群基数4-6千万人。

根据症状描述，目前对于顽固性便秘的诊断基本基于主观层面的判断，并没有行之有效的诊断方式。因此找到简单准确的诊断方式尤为重要，而本研究团队发现的顽固性便秘特异致病菌，以及以此研发的致病菌PCR检测方法，为临床提供了准确而便捷的诊断方式，起到早诊断早治疗的目的。

b检测方法

荧光定量PCR方法：采用高敏感探针法荧光定量PCR（专利技术）检测PIB菌的特异性DNA序列，评估粪便中PIB的感染情况。

c样品提供方法

粪便样本采集：对粪便的基本要求是：重量>1-2克、新鲜样本。

1、取样需新鲜，因此排便时先准备保鲜膜或袋备用。

2、用保鲜膜或袋盛放粪便，并挖取两块蚕豆大小块状粪便。

3、分别放入紫色圆柱状取样器中，储于低温冰箱或寄回。

d结果判读

利用ROC曲线法确定PIB菌感染情况，粪便样本扩增曲线呈对数增长且Ct<=32，同时阴性质控品扩增曲线对数增长且Ct>32，为阳性感染者；粪便样本扩增曲线呈对数增长且Ct>32，且阳性质控扩增曲线呈对数增长且Ct<=32，为无感染者。

e常见问题

问：我反复便秘半年多了，需不需要检测PIB菌？

答：建议做。

问：我反复便秘十几年了，需不需要检测PIB菌？

答：非常必要做，您是受检的重点人群。

问：我偶尔有便秘，需要做检测吗？

答：一般可以不做，如为保险起见也可做。如您的家人或共同生活在一起的人有慢性便秘，建议做。

问：我是怎么被PIB菌感染的？PIB菌会传染给其他人吗？

答：目前还完全不清楚PIB是如何感染人的，通过食物感染的可能较大。因PIB菌在粪便中含量极低、也容易死亡，一般不会传染给其他人。

问：如果查出我是PIB菌阳性，周围人会不会嫌弃我啊？

答：不会的，因为PIB不会传染。PIB菌感染比痢疾杆菌感染要轻微得多，您不会嫌弃一个痢疾病人吧。

问：我检测出PIB菌阳性，怎么办？

答：在医生的指导下，进行治疗、复检。现已有针对顽固性便秘致病菌PIB的治疗方案，若检测结果为阳性，可在定点医院接受治疗。

问：我检测PIB菌阴性，是不是就安全了？

答：先祝贺您，但不能百分之百保障您没有PIB菌感染。PIB菌在粪便中含量非常低、也容易死亡，一次检测不出来也是情理之中。因此，复检也是必要的。

问：PIB菌检测流程是什么？

答：厂家提供样品收集试剂盒，受检人或医务人员根据说明书收集粪便样品、冰箱保存，统一送检。检测完成后，提供检测结果报告。

问：收集粪便样品前应注意什么？

答：收集粪便前2-3天内，不应服用抗生素等影响肠道微生物的药物。

问： 粪便样本采集过程中的注意事项有哪些？

答：粪便样本采集试剂盒内含样本保存液，未经打开，可于室温存储；若打开瓶盖，请置于冷藏保存，并尽快使用。检测所需粪便样本呈蚕豆大小，获得后需浸没于保存液中。

问：收集后粪便样本如何保存？

送检样本应尽可能新鲜，所以采集好样本后立即送检。如需多次采集或遇夜间，可于冰箱冷冻室内冻存，择日送达指定检测地点。

问：通过何种途径获知粪便PIB筛查结果？

答：如无特殊情况，检测结果将于7个工作日内以短信或邮件告知。

1.3溃疡性结肠炎致病菌检测

a背景介绍

溃疡性结肠炎是一个特发难治愈的慢性结肠粘膜溃疡性疾病，属于炎症性肠病的一种，溃疡性结肠炎在中国有150万人以上发病。粘膜炎症始于直肠，直至衍生到结肠近端，主要症状为血性腹泻，也可累及到肝脏，皮肤以及视觉等器官，重则癌变。溃疡性结肠炎现在的治疗目的主要是控制缓解症状和抑制炎症，但要治愈基本很难实现，关键在于其发病机理还不明确。

粘膜屏障损伤目前被认为是溃疡性结肠炎的最初表型，屏障的丢失会增加肠腔内抗原的获得，致病菌侵袭，这种功能紊乱是溃疡性结肠炎的因还是果目前还不清楚。而我们首次发现溃疡性结肠炎是条件致病菌KFQ菌感染并分泌毒素引起的，提出了溃疡性结肠炎的病原新机制，并建立了独特的体外分析和检测致病菌的筛选方法。

b检测方法

荧光定量PCR方法：采用高敏感探针法荧光定量PCR（专利技术）检测KFQ菌的特异性DNA序列，评估粪便中KFQ菌的感染情况。

c样品提供方法

粪便样本采集：对粪便的基本要求是：重量>1-2克、新鲜样本。

1、取样需新鲜，因此排便时先准备保鲜膜或袋备用。

2、用保鲜膜或袋盛放粪便，并挖取两块蚕豆大小块状粪便。

3、放入取样器中，储于低温冰箱或寄回。

d结果判读

利用ROC曲线法确定KFQ菌感染情况，粪便样本扩增曲线呈对数增长且Ct<=32，同时阴性质控品扩增曲线对数增长且Ct>32，为阳性感染者；粪便样本扩增曲线呈对数增长且Ct>32，且阳性质控扩增曲线呈对数增长且Ct<=32，为无感染者。

e常见问题解答

问：我不定期腹泻是否需要查KFQ菌？

答：可以查，不明原因的腹泻，反复发作不易根治，则需要尽快查。

问：我已经诊断为溃疡性结肠炎，查KFQ菌还有用吗？

答：非常有用，研究团队得出溃疡性结肠炎患者中有90%的都是KFQ菌感染，因此如果尽快查出KFQ菌的存在，可进行对症下药，早诊断早治疗。

问：诊断为溃疡性结肠炎后，目前医院推荐的都是水杨酸类以及生物抗体药控制病情，你们的方法和治疗手段的优势在哪里？

答：研究团队长达5年的研究成果表明90%的溃疡性结肠炎都是有KFQ菌感染引起的，针对病因不清的诊断和治疗手段，我们是从病原学出发，针对性的杀死KFQ菌，从源头切断病原，从而达到根治的目的。

1.4克罗恩氏病相关致病菌检测

克罗恩氏病是另一种原因不明的炎症性肠病，全世界有超过500万人患者，在胃肠道的任何部位均可发生，但好发于末端回肠和右半结肠。本病和溃疡性结肠炎两者统称为炎症性肠病(IBD)。本病临床表现为腹痛、腹泻、肠梗阻，伴有发热、营养障碍等肠外表现。病程多迁延，反复发作，不易根治。本病又称局限性肠炎、局限性回肠炎、节段性肠炎和肉芽肿性肠炎。

临床表现为腹痛、腹泻、腹块、瘘管形成和肠梗阻，可伴有发热、贫血、营养障碍及关节、皮肤、眼、口腔黏膜、肝脏等肠外损害。本病可反复发作，迁延不愈。

本病多用水杨酸偶氮磺胺吡啶、肾上腺皮质激素或6-巯基嘌呤、生物制剂类等药控制活动期症状。解痉、止痛、止泻和控制继发感染等也有助于症状缓解，因病因不清，目前除肠镜外尚无准确简便的诊断方式，亦无有效治疗方法，因此本团队的研究成果发现克罗恩病的致病菌CDB尤为重要，针对其设计的探针法荧光定量PCR检测方法能成为克罗恩氏病目前最精准的诊断方式。本项目在发现致病菌基础上建立的诊断、治疗方法具有国际唯一性。

（正完善中）